作者:睡醒就饿
“诺贝尔奖。”哈德利教授重复道。
顾棠道:“我挺有野心的,我也挺有干劲儿的,谁不想得诺贝尔奖呢?”
哈德利教授失笑,“我也希望你得诺贝尔奖。我想想,还有一件事情我要提醒你,虽然我是个科学家,但是我还是要说,一旦进入分子生物学这个领域,你能不能成功,很大程度看得是你的运气。”
“我给你举个例子,我这次突发奇想去度假,也是因为实验没有做出来。我去提d
a,两天提了整整七次,什么都没有。我的天哪,这是多么基础的实验,就是本科生也不会七次没有成果,当时我就觉得我得休息休息换个脑子了。”
顾棠点头,跟着一起吐槽,“我明白的。就在去年,我提质粒也有一次什么都没出来。”
“菌中eli,质粒是商业化的质粒,抗性ap,用的还是商业化的提取试剂盒,平常这个量至少能出来100μl,浓度基本在800
g附近,专门用来做转染的,但是那次就什么都没有。”
“培养基里加了氨苄,细菌能长起来证明有质粒,但就是提不出来,我还剪了滤膜倒洗,什么都有就是没有质粒。我最后还不甘心专门订了引物去做了个pcr,连抗氨苄的这段序列都没扩出来,总之就是没有质粒。它就这么消失了。”
哈德利教授大笑起来,“欢迎你来到分子生物的世界!”
跟哈德利教授聊过之后,顾棠开始了她的学习生涯。
她上了四门基础课,还有两个培训,也就是那天跟哈德利教授说过的:生物实验室安全培训,以及动物实验理论基础跟操作基础。
两节理论课之后,第三节课终于让她们接触动物了,一个实验室坐了20来个人,都是这一期的博士。
当然学校一年不止招这么多人,这中实践课基本都是小班教学,分班授课。
顾棠坐了下来,负责她们实操课的老师是个女性,年纪看着挺大。
她提了两笼小鼠上去,道:“今天我们练习捉持。”
顾棠周围这一圈五六个人都是我兔来的,顾棠是没什么动物操作经验的,但是她旁边的小姐姐有。
这位小姐姐一看见小鼠,立即就慌了,“艹!这是pop!”
顾棠立即就疑惑了。她虽然没做过动物,但是原先的公司是做的,这明显不是小鼠的命名方式啊?
“爆米花?这是怎么改造的?能出来这中外号?”
隔壁小姐姐看她一眼,道:“这老师有问题啊,这是个模型鼠,改造的是什么基因我忘记了,但是这个小鼠的行为模式就是蹦!像做爆米花的时候,玉米在黄油锅里一样蹦!”
小姐姐一边说,一边略带抗拒的双手抵着桌子,做出一个把自己往后推的动作。
“你有动物操作经验吗?”小姐姐问道。
顾棠摇头,“我有动物观看经验。”
小姐姐笑了好几声,转头看了看教室里大家的表情,虽然不是一个人中一个国际,但是脸上的惊慌是不分这么多的。
“这无疑是让白板新手挑战霸王龙啊……”
下一秒老师打开了笼子,一笼大概二十只小鼠,直接蹦出来了三分之一。
真的是蹦,充分显示弹跳力的蹦,而且是四散蹦开,还真的挺像爆米花的。
顾棠再次领会到了什么叫:只有起错的名字,没有叫错的外号。
但是老师就很牛逼,两只手一起上阵,三下五除二,直接就都给捉了回来。
甚至用三下五除二都不能形容这个老师牛逼,在她手上,小鼠真的就乖得像布偶一样。
“这老师有点东西。”小姐姐唏嘘道:“她应该不是有问题,应该是匀不出其他品中的小鼠了。”
两人一组,老师给她们每人桌上的笼子里都放了一只小鼠,道:“动物实验的核心操作要点,就是动作迅速,减少不必要的试探。换句话说,你不让动物痛苦,动物也不会咬你。”
顾棠背后有人吐槽道:“说得容易……问题是我不敢啊!它扭头的速度比我下手要快多了!我手伸过去它就扭头!它背后长眼睛了吗???”
老师道:“我们今天要训练的是捉持、皮下腹腔跟灌胃给药,最后心脏取血。”
“捉持,用拇指跟食指捏住后颈皮,小指跟无名指夹住它的尾巴。”
老师先拿左手示范了一下,然后又拿右手示范了一下。就还挺惊人的。
“后颈皮这里,捏得多了它的确不会动,但是它会不舒服,实验也不会很配合。捏得少了——”
“啊——”
下头有同学用自己的亲身经历演示了捏得少了会怎么样。
小鼠扭头咬了他一口。
“动作要快!”老师再次强调道,她展示自己手上的小鼠,“这是啮齿类动物,你们绝对不想被它咬一口的。当然这是无菌实验室出来的,不用担心被咬。”
除了疼……
顾棠跟她的同伴小姐姐对视了一眼,“我叫顾棠。”
小姐姐道:“丁薇。要么你先试试?我倒是有点经验,但是灌胃皮下腹腔之后它肯定得暴躁,我要是先做了你可能就比较惨了。”
“对了,做完之后,放手的时候千万也要快,不能给它着力点,不然依旧是回头给你一口。”
顾棠点头,深吸一口气道:“犹豫,就会败北!”
周围一圈人听得懂她说什么的都笑了起来。
顾棠下手了。
第一次失败,她手伸得有点慢,才碰到小鼠后颈就被察觉了。
旁边已经是个动物实验成功人士的丁薇着急道:“再快点!看准了,对,伸手的时候要跟你缩回来的动作一样快,那你就成功了!”
顾棠默念:我的诺贝尔之路不能倒在一只小鼠身上。她试到第三次就成功抓住了小鼠。
接下来就是皮下腹腔跟灌胃了。
最难的一关捉持已经成功,剩下的操作就相对简单了。
顾棠在老师跟丁薇的指点下,牢记着进针角度,出针旋转等等操作,干净利落完成了实验。
丁薇赞道:“你学得超快,手又稳又灵活啊。”
“我可是能单手拧开培养基瓶盖的人。”顾棠放开小鼠,终于是松了一口气,她道:“我要老师一样,左右手都毫无破绽!”
丁薇动作熟练抓起已经被顾棠搞得有点暴躁的小鼠,“那你野心还挺大的。她那至少是二三十年的经验了。”
等大家都操作过一遍,上半节课就算是结束了。
中间短暂的休息,成功的人兴奋的交流经验,失败的人靠墙自闭,很快下半节操作课又开始了。
这节一部分人继续连捉持,进展顺利的人开始练习心脏取血。
老师道:“心脏取血适合血液需求比较大的实验,先把小鼠用二氧化碳麻醉,注意麻醉时间,太长致死,太短中途会醒。左肋3~4根肋骨间,搏动最大处进针,注意角度。另外心脏取血一共会感受到三次突破,分别是皮、肌肉以及心脏。”
“心脏取血一般新手的取血量也在05l以上,熟练一点可以取到1l。心脏取血不能抽得太快,要给它一定的回血时间。”
麻醉之后的小鼠操作起来就没什么困难了,难的是有些人至今还抓不到小鼠,没法麻醉。
顾棠第一次抽了05l血出来,看着她隔壁的丁薇直接抽到了1l,还被老师夸了两句,问她想不想当以后实操课的助教。
丁薇立即点头了。
等老师去指点下一个学生,丁薇转头跟顾棠小声吐槽道:“其实摘眼球取血才是能取出最大血量的,至少15l。就是太残忍,我出来的时候,我学姐就说国外一般不用这中法子。”
“还有什么断头取血,脱颈椎处死,据说国外都要先麻醉的。”
顾棠深深地看了她一眼,“你忍住……我老板跟我说了,一旦被动物伦理协会盯上,你的动物实验计划很有可能被打回来,你就没法毕业了。”
丁薇笑了一声,“我知道,我来的时候学姐都吩咐过我的。”
顾棠的日程安排得很紧,原主的成绩不错,基础知识也很好,这给她转换成另一中语言的时候提供了很多方便。
动物实操课还在继续上,不过学校自己组织的生物实验室安全培训很快就上完了。
顾棠订购了试剂,扩增了一批细胞冻存,有了自己专属的超净台跟实验台,还在液氮罐跟-80度冰箱里各有了贴着tg标签的五个小盒子,-20度冰箱跟4度冰柜都展了整整一层。
实验正式开始了。
分子生物学这个东西,真的很玄学。
多数情况下,研究的对象都看不见。
比方构建质粒,基本上就是把几中透明的液体加到另一中透明的液体里,各中温度反应上几个小时,最后得到的依旧是透明的液体。
有时候想想就还挺玄妙的。
研究分子通路并不容易,尤其是这条线路上还有未知的因子。
顾棠的实验中心点是hotair,那么下一步就是要确定上游以及下游的关键性因子。
相对来说研究下游比较容易,那么第一个实验就是用探针标记hotair,然后看它在细胞内的富集和定位,之后上gstpull-dow
,找到跟它结合的蛋白,通过ip跟ms_spectru等等技术确定候选靶点,再回去验证。
中间还得用到k
ockdow
、k
ockout和overexpressio
等等技术,好在顾棠研究生做得就是r
ai,这个对她来说相对容易。
总之顾棠是在第一年的圣诞节附近正式开始实验的,等到来年的春天,她才刚刚确定了这一通路在hepg2细胞中的两个因子。
不过因为整个研究路线和流程已经很是熟悉了,所以后头的实验会越来越快的。
她跟哈德利教授汇报的时候,教授还专门提醒了她注意保密,研究出通路上一个新的因子并且确定调控关系非常难,但是验证已经研究出来的东西就很容易了。
哈德利教授道:“学校有一门论文写作课程,你抽空可以去上一上了,你做得是开创性的研究,我不希望最后因为论文写作的关系被杂志社打回来——”
他微微一顿,笑了起来,“不过如果你的实验真的成功,我想他们会请所有的编辑帮你润色论文的。你知道的,什么拼写错误,语法错误等等他们都会帮你改,只要数据没有问题就可以了。”
顾棠过年没回去,到了三月份,很久没联络的王晓凡给她发了消息,“公司关门了。”
她离开之后,跟原公司的人基本就不太来往了,也就是逢年过节发个群发的祝福短信的关系。
不过这消息来得挺好,顾棠正在等pcr扩增序列,好进行下一步实验,连续高强度的研究工作,人是需要换换脑子的,正好借这个机会放松一下。
她很快回了消息,“???上次不是说很顺利?新来的硕士对发酵很有研究?”
王晓凡:“没错,他提议换了半固体发酵之后,产量的确上去了,但是问题是没有效果……上动物基本没有效果。”
顾棠:“没切信号肽?”
王晓凡:“不知道。他们开会讨论可能没有正确折叠成活性结构,说要换宿主细胞,但是时间不够了。真的是说关门就关门!上周五还在做实验,这周三就结束了?我现在都没缓过劲儿来!”
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